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巴马森林病毒RT-LAMP试剂盒50次
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发货 上海市松江区
参数

公司产品仅用于科研

用途范围

详见说明书%

纯度

进口、国产

产地

谷研

品牌

主营: 化学原料和化学制品制造业

上海市松江区

产品名称:巴马森林病毒RT-LAMP试剂盒50次

英文名称:RT-LAMP kit for Bama Forest virus

产品货号:GOY6476

产品规格:50次

产品保存:-20℃保存

产品有效期:一年

储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。

运输:低温、避光,快递免费送货上门。

 

技术保护点:

一种用于检测梅毒螺旋体的LAMP引物组,其特征在于,包括一对外引物和一对内引物,其中,所述外引物的核苷酸序列分别为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的正向外引物和反向外引物,所述内引物的核苷酸序列分别为SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的正向内引物和反向内引物。

 

使用方法:

一、巴马森林病毒RT-LAMP试剂盒50次稀释标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。

1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。

2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液,*用带芯枪头,下同)。

3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照(浓度为 1×10E8 拷贝/μL,试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 DNA 的制备

7. 用自选方法纯化样品的 DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。

8. 如果有 N 个样品,则需要进行 N+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。

三、设置 qPCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),6 个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做 1 次重复,则标记 N+4 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),1 个用于PCR 阳性对照。

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特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!

PCR反应五要素:

  参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 

  引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。

  设计引物应遵循以下原则:

  ①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。

  ②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。

  ③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 

  ④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。

  ⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数*个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。 

  ⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。

  ⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

 


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用途范围 公司产品仅用于科研
纯度 详见说明书%
产地 进口、国产
品牌 谷研
规格 50T
货号 GOY6476
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