ELISA检测概述
      ELISA酶联免疫试剂盒是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。 由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。
产品名称：大鼠基质金属蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA酶联免疫试剂盒
英文名称：Rat tissue inhibitors of metalloproteinase 4, TIMP-4 Elisa Kit
货号：BH-H9043
规格：48T/96T
自备物品:
1.     酶标仪（450nm）
2.     高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.     37℃恒温箱

应用范围：血清、血浆、组织匀浆、细胞培养物上清或其它相关液体（本产品仅供实验室科研及非临床用途）
     大鼠基质金属蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA酶联免疫试剂盒实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即：用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。目前我们对客户提供比较常用的ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法服务。注意事项：
1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物请避光保存。
7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9． 本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤:
1.        标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。
2.         加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.         温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.         配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.         加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.         温育：操作同3。
8.         洗涤：操作同5。
9.         显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10.     终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.     测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
Ishikawa人子宫内膜癌细胞 Human endomeial carcinoma cells Ishikawa RPMI-1640+10%FBS氟胞嘧啶/5-氟胞嘧啶质量规格：>99%,BR,可用于细胞培养Flucytosine

IL12A & IL12B Protein Mouse 重组小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白氟胞嘧啶/5-氟胞嘧啶（标准品）质量规格：HPLC>98%,标准品Flucytosine

U14(小鼠子细胞) 5×106cells/瓶×2 HPAC(人胰腺癌细胞)非对称二甲基精氨酸质量规格：>98%,盐酸盐形式，美国进口ADMA

CM-M004小鼠气管上皮细胞完全培养基100mLN'-硝基-D-精氨酸质量规格：0.98N'-Nitro-D-arginine

TNFSF11 Others Human 人 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 人细胞裂解液 (阳性对照) D-天冬酰胺，一水质量规格：0.99D-Asparagine monohydrate
NRG1 Protein Canine 重组狗 NRG1-alpha 蛋白 (ECD, His 标签)Bz-rA亚1酰胺单体质量规格：>98%,BRBz-rA Phosphoramidite

MA-891(小鼠癌高转移细胞) 5×106cells/瓶×2 脑成纤维细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)i-bu-rG亚1酰胺单体质量规格：>98%,BRi-bu-rG Phosphoramidite

神经星形胶质细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)PF299804（EGFR抑制剂）质量规格：>99%,可用于细胞培养Dacomitinib

ANGPTL4 Others Human 人 ANGPTL4 人细胞裂解液 (阳性对照) Ac-rC亚1酰胺单体质量规格：>98%,BRAc-rC Phosphoramidite

大鼠肾足突细胞完全培养基 100mLRp-腺苷 3′,5′-环单硫代1酸酯钠盐质量规格：美国进口Rp-Adenosine 3′,5′-cyclic Monophosphorothioate,  Salt
大鼠基质金属蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA酶联免疫试剂盒CM-R077大鼠血管外膜成纤维细胞完全培养基100mLN-Z-S-pxenyl-L-cysteineN-苄氧羰基-S-本基-L-半胱酸25克BR，98%

GAL Others Human 人 Galanin / GAL 人细胞裂解液 (阳性对照) 间录本安 3-Chlorocnilinq 108-4-9

小鼠海马趾神经元MN-hN,N-Dimetxylglycinexy7nochloride盐酸-N,N-二甲基乙酸1克BR

NOR-10细胞，小鼠骨骼肌成纤维细胞 Asp2人胚胎肾细胞转化细胞,FC33细胞 人股骨成骨细胞HO-fdNTPMIXTURE,25mMSOLUTIONdNTP混合溶液超级透明无色液体FROZENsigma

家猪皮肤细胞;SSC-S111024-24-1洋地黄皂苷DIGITONIN
DLD-1细胞，人结直肠腺癌上皮细胞 人视网膜母细胞瘤,Y79细胞 人导管癌细胞;ZR-75-30奈比洛尔盐酸盐;奈必洛尔Nebivolol hydrochloride质量规格：>99%,BR

HK-2(人肾小管上皮细胞) 5×106cells/瓶×2奈必洛尔(标准品)Nebivolol hydrochloride质量规格：HPLC>99%,标准品

ACVR2B Others Human 人 ACVR2B / ActivinR-IIB 人细胞裂解液 (阳性对照) 核固红Nuclear fast red质量规格：BS

人真皮成纤维细胞-新生儿cDNAHDF-n cDNA胭脂红Carmine质量规格：BS,用于生物学染色

NA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/California/04/2009) 神经氨酸酶 (Neuraminidase / NA) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 溴酚红Bromophenol red质量规格：AR