可视化UNG-LAMP试剂盒

产品及特点 本试剂盒是本公司可视化 LAMP 试剂盒的升级版，它有下列特点：

1. 防污染,在 2×可视化 LAMP MagicMix 中整合了 dUTP-UNG 防污染系统，解决了 LAMP 扩增非常容易污染的这个棘手问题。

2. 可视化，整合了本公司的 A 型 LAMP 可见光染料，不需要任何仪器即可肉眼判断是否有扩增。

3. 使用改良的 Bst DNA 聚合酶，使本产品既可用 DNA 为模板于 LAMP 扩增，也可用 RNA 模板进行 UT-LAMP 扩增。DNA 聚合酶只有在 40℃以上时扩增才启动，反应特异性更强。

4. 扩增效率更高，扩增效率可达到上亿倍，比 PCR 灵敏一个数量级，可检测到单拷贝的 DNA 分子。

5. 本试剂盒足够 50 次 20uL 体系的可视化 UNG-LAMP 和 UNG-RT-LAMP扩增。

6. 本试剂只能用于科研，不能用于临床。

规格及成分 成 份 编 号 塑料袋包装
2×可视化 UNG-LAMP MagicMix 180703a 500 uL
使用手册 180703sc 1 份

运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂 LAMP 模板、RT-LAMP 模板及 LAMP 引物 

使用方法 

1. 配制自备的5×LAMP引物混合液：先加超纯水（不要用TE）将各引物干粉稀释到下表所列母液浓度，然后在一新的离心管中按表中所列加入量加入各种引物母液和自备超纯水，后得到1mL的5×LAMP引物混合液。如果不使用Loop引物，其体积由水填充如果需要配制的5×LAMP引物混合液体积大于或小于1mL，则各成分的用量请按比例调整。此混合液可以在-20℃放置2年。

引物名称 母液浓度 加入量 在混合液中终于浓度

FIP 引物 100 uM 80 uL 8 uM

BIP 引物 100 uM 80

自备超纯水 780 uL

2. 在新的反应管中设置UNG-LAMP或UNG-RT-LAMP反应：成份 样品管 阴性对照 1 阴性对照 2

2×可视化 UNG-LAMP Mix 10 uL 10 uL 10 uL

自备 5×LAMP 引物混合液 4 uL 4 uL -

自备模板 DNA 或 RNA 1-100ng - 1-100ng

补超纯水到 20 uL 20 uL 20 uL

3. 混匀，此时反应液呈现非常浅的绿色，由于是否有反应是跟阴性对照和反应前对比，所以一定要设置阴性对照，并且反应前要手机照相留存以供反应后比对。

4. 置于25℃5分钟（让UNG灭活可能的LAMP的污染），然后放63℃扩增60-120分钟（如果不使用Loop引物，则好保温2小时）。如果是在PCR仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，必须在孔中加水以

填充孔和管子间的空隙，并且在管中加50uL石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率）。

5. 80℃10分钟灭活Bst DNA聚合酶和UNG酶。

6. 如果有阳性扩增，则反应液将变成绿色，如果没有阳性扩增，反应液将还是浅绿色。标准的反应结果如下图（左边1个为阴性，右边2个为阳性）：

7. 如果需要电泳确认，则取扩增产物5 uL直接在2%的琼脂糖凝胶电泳（不需要再加上样液），可见LAMP特征性电泳图谱。一般不简易在开盖，这正式产生污染的原因。