反应五要素:
中山病毒PCR检测试剂盒参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
准备物品:
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀释液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
产品说明书 1份
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
中山病毒PCR检测试剂盒 | Chuzan VirusRTPCR | 50T |
普通PCR反应流程:
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
使用方法 :
1 实验所需器材与试剂
1.1 器材
1)PCR仪
2)PCR反应管
3)电泳仪及水平电泳槽
4)高速离心机
5)微量移液器及移液器吸头
1.2 试剂
1)琼脂糖
2)EB(溴化乙锭)
3)去离子水或双蒸水
注意事项:
5.1使用本试剂前请仔细阅读本说明书全文。
5.2 操作时应尽量少说话,因口腔中也含有支原体,可能引起样品污染,而造成假阳性;整个检测过程中,反应体系的配制、样本处理及加样、PCR扩增应分区域进行,以避免交叉污染。 5.3 实验时,试剂盒组分中的试剂使用前应充分融化并混匀(混匀时禁止激烈振荡,只需要进行上下倒置多次进行混匀)。
5.4 反应管中加好所有的试剂后,应尽快上PCR仪进行扩增,以免形成过多的二聚体。
5.5细胞培养物中含有青霉素和链霉素等抗生物素不会影响本品的检测结果。如果用户需要进一步提高检测灵敏度,建议细胞在不含青霉素和链霉链等抗生素中进行培养2-3天后送样检测。
秦艽甲素 现货促销 规格: Curcubitacin IIb
秦皮苷Bullatine A
秦皮乙素Bullatine B
青阳参苷元Sanguinarine
人参苷元F11Sanguinarine Chloride
鞣花酸 现货促销 规格: Phosmet
三尖杉宁碱 Secoisolariciresinol Diglucoside
伞形花内酯 现货促销 规格: L-Nicotine
酚葡萄糖醛酸苷 现货促销 规格: Corydaline
苷 Tetrahydropalmatine hydrochloride
商陆皂苷元 现货促销 规格: Bergenin
圣草次苷 现货促销 规格: Palmatine hydrochloride
圣草次苷,圣草枸楷苷 现货促销 规格: ChelerythrineChloride
石吊兰素Ligustrazine Hydrochloride
石杉碱丙 现货促销 规格: Phellodendrine chloride
石杉碱乙 现货促销 规格: Coptisine chloride
中山病毒PCR检测试剂盒人肠三叶因子(ITF)Elisa Kit(化学发光免疫分析法)Stachydrine hydrochloride 100mg
人肠病毒(Enterovirus)Elisa Kit(化学发光免疫分析法)Betaine hydrochloride 1mg
人层连蛋白/板层素(LN)Elisa Kit(化学发光免疫分析法) Emetine Hydrochloride 1mg
人布鲁氏菌抗体IgG(Brucella Ab IgG)Elisa Kit(化学发光免疫分析法)Berbamine Hydrochloride 1mg
人不透光相关蛋白(OPAs)Elisa Kit(化学发光免疫分析法) Berberine hydrochloride 1mg
人不耐热肠毒素B亚单位(LTB)Elisa Kit(化学发光免疫分析法) Jatrorrhizine hydrochloride 1mg
人不对称二甲基精氨酸(ADMA)Elisa Kit(化学发光免疫分析法)Leonurine hydrochloride 1mg
人补体因子D(CFD)Elisa Kit(化学发光免疫分析法)Yohimbine Hydrochloride 10mg
液化沙雷菌PCR检测试剂盒
新港沙门氏菌PCR检测试剂盒
肠道沙门氏菌PCR检测试剂盒
沙雷菌通用PCR检测试剂盒
发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒PCR检测试剂盒
兔痘病毒PCR检测试剂盒
RIN-m5f-LUC荧光标记细胞株
Hep-3b-RFP荧光标记细胞株
4T1-RFP荧光标记细胞株
UMR106-RFP荧光标记细胞株
HT-29/DDP人结直肠腺癌顺铂耐药株
A375/DDP人恶性黑色素瘤顺铂耐药株
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