ZK-PL4212
货号
1ml 5ml
规格
子科生物ZIKER
品牌
支
包装
白萱萱
主营: 研究和试验发展 | 专业技术服务业
广东省深圳市
碘化丙啶PI溶液(1mg/ml)
货号:ZK-PL4212
品牌:子科生物ZIKER
描述:
碘化丙啶 别名:皮萨草, 英文名称: propidium iodide,CAS号: 25535-16-4, 分子式: C27H34I2N4, 分子量: 668.40。 碘化丙啶(PI)是一种溴化乙啶的类似物,可以嵌合到双链DNA和RNA的碱基对中释放红色荧光的荧光染料,无碱基特异性。可对DNA染色的细胞核染色试剂。碘化丙啶不能通过活细胞mo,即正常细胞和凋亡细胞在不固定的情况下对PI拒染;而坏死细胞由于失去膜的完整性,PI能穿过破损的细胞mo而对核染色,可鉴别死细胞。PI经常被用来与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用,能同时对活细胞和死细胞染色。碘化丙啶与双链DNA结合后产生荧光的强度与双链DNA的含量成正比,可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定,然后根据DNA含量的分布情况,可以进行细胞周期和细胞凋亡的分析。碘化丙啶染色后,假设G0/G1期细胞的荧光强度为1,含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2,正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1~2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化,导致部分基因组DNA片断在染色过程中丢失,因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染,即荧光强度小于1,在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰,即凋亡细胞峰。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535 nm和615 nm。本产品为PI水溶液,浓度为1mg/ml。使用时根据实验不同直接将本产品用相应溶液稀释到工作浓度。
适用范围:
本品常用于流式细胞仪分析和显微镜观察,检测细胞凋亡或细胞坏死,以及细胞周期的分析。
储存:
-20℃ 避光保存6个月;4℃保存1个月。
组成:
碘化丙啶染色液(1mg/ml) 1ml, 5ml 稀释液 50ml,
染色步骤:
1. 培养细胞染色
(1)染色前取适量PI水溶液加到稀释液中,制备成PI工作液(为20~50μg/ml)。
(2)将1/10培养基体积的PI溶液加入到细胞培养基中,37℃培养细胞10-20分钟。
(3)用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次,荧光显微镜观察。
2. 固定细胞染色
(1) 单层细胞培养标本或悬浮细胞经4℃预冷70%乙醇或4% 多聚甲醛固定1小时。
(2) 用0.01mol的PBS(pH 7.4)冲洗。
(3) 沥干后加入PI工作液,室温孵育15分钟;细胞含量范围一般为0.1~1×106之间。
(4) 用于流式细胞仪检测;或冲洗后封片, 荧光显微镜下观察,激发波长为535nm,发射波长为615nm。
染色结果:
荧光显微镜观察,DNA呈红色荧光.
说明:
1. 荧光染料都存在淬灭的问题,建议工作液用前配制;染色后尽快检测。为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
2. 在获得细胞沉淀的离心过程中,对于特殊细胞,如果细胞沉淀不充分,可以适当提高离心力或延长离心时间。
3. 如果检测组织的细胞周期与细胞凋亡,必须把组织制备成单细胞悬液,才可以进行检测。
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