原位杂交过程

　　杂交前可进行预杂交，以防止较高的背景染色。预杂交条件与杂交条件相同，只是预杂交液中不含探针和硫酸葡聚糖。

　　靶DNA的变性（对mRNA的原位杂交无需此步）

　　样品DNA的变性在DNA-DNA杂交检测中是必须的步骤，但同时可能会造成样品形态学的部分破坏，此步是实验中需要优化的一个步骤。常用的变性方法为碱变性和热变性，实验时可以摸索变性时间、变性温度等参数以获得佳条件。

　　如使用热变性方法，可在杂交时将探针的变性和样品DNA变性同步进行：将样品和探针溶液加盖盖玻片，置于烘箱80℃变性，染色体DNA样品处理2min，后冷却至37℃进行杂交。组织样品DNA的变性时间可增加至80℃10min。

肝纤维化动物模型化学性损伤法：

雄性Wistar大鼠，体重130g左右，用腹腔内注射，次20mg/100g体重，从第二次起12mg/100g体重，每周注射2次，共8周。

评价:第3周，在肝小叶间中间带出现大片的肝细胞变性坏死和炎细胞浸润，炎细胞浸润、坏死细胞数和程度超过猪模型。6周后出现纤维束，纤维晚于和少于猪模型。大鼠肝纤维组织中有I型胶原的mRNA增多。

肝纤维化动物模型特点：

①肝纤维化出现早，出现率高；

②动物整体损伤轻微，毛发、生长情况正常；

③纤维化组织中大量胶原，Ⅲ、Ⅳ型前胶原mRNA增多。

慢性活动性患者循环复合物多为阳性，猪模型可用于慢性所致肝纤维化的研究，对于研究复合物的形成，沉积和清除及对于防治损伤性肝纤维化有效的筛选，具有意义。

（IDA）发生的主要原因是由于铁的摄入不足和/或铁丢失过多，引起机体血红蛋白合成障碍导

致。IDA模型有大鼠、小鼠、兔、鸡、猫、狗、猴等，其中以大鼠为常用。

动物模型方法：

1. 给予低铁饮食。饲料含铁量≥50mg/kg能满足大鼠的基本需要，低铁饲料的铁含量≤10mg/kg，标准饲

料铁含量为220-270mg/kg。饲料配方以酪蛋白或脱脂奶粉作为蛋白来源，玉米淀粉或蔗糖作为碳水化合物来源，加入植物油，混合维生素和混合无机盐配制。

近来通过络合剂1%EDTA-2Na除去国产饲料中的铁，取得满意的实验结果。

2. 给动物逐次少量放血，造成铁的慢性丢失。通常采用剪尾的方法，一方面放血不但引起铁的丢失，而且还可以引起其它营养素的丢失；另一方面剪尾易

引起动物而。

3. 低铁饮食辅以定期少量放血。