武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。
甘蔗是的糖料作物,甘蔗黑穗病已成为世界性甘蔗主要病害,也是我国甘蔗栽培上严重的真菌病害,挖掘甘蔗自身抗病基因对抗病育种有重要意义。植物病程相关蛋白(Pathogenesis Related Proteins,PRP/PRs)是在某种病理或病理相关环境条件下,植物体内受诱导产生的特异蛋白质,其在植物抗病反应中起重要作用,与植物系统获得性抗性(systemic acquiredresistance,SAR)密切相关。β-1,3-葡聚糖酶属于典型的PR2蛋白,可水解许多种真菌细胞壁的主要成分β-1,3-葡聚糖,在植物抵御真菌病原的防卫反应中发挥重要作用。本研究在甘蔗响应黑穗病菌侵染的表达谱分析的基础上,选择与防卫蛋白相关的差异表达基因序列,利用电子,结合RT-PCR和基因实验技术,以高抗黑穗病的甘蔗无性系Ya05-179为实验材料,扩增获得甘蔗β-1,3-葡聚糖酶家族基因的2个成员,并命名为ScBG1和ScBG2。生物信息学分析显示,ScBG1基因DNA序列全长1 175bp,编码332个氨基酸,含有1个长度为156bp的内含子;ScBG2基因DNA序列全长1 820bp,编码392个氨基酸,含2个长度分别为156bp和973bp的内含子;上述2个基因核酸序列的同源性为39.58%,均属于糖基水解酶第十七家族。
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构建了植物表达载体pBRSAg,该载体具有完整的植物表达元件,CaMV35S启动子、农T-DNA左右边界、植物报告基因gus和植物选择标记基因hpt,适用于农的转化;通过冻融法将重组质粒pBRSAg转入根癌农LBA4404中,利用农介导法转化叶盘,经筛选培养获得植株。抗性植株经GUS染色和PCR检测为阳性,初步表明表面抗原基因在中得到表达。
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