植物种子活性叶绿体分离试剂盒产品说明书

图片仅供参考，以实物为准

主要用途

植物种子活性叶绿体分离试剂是一种旨在通过物理破壁和化学破膜及离心处理方法，从植物种子组织中分离出完整而纯化的活性叶绿体细胞器的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于菠菜、豌豆、莴苣、卷心菜、甜菜、烟草等各种新鲜植物种子（seed）组织等活性叶绿体成分的分离。用于高等植物不育性、叶绿体功能和活性、遗传等研究。 产品即到即用，操作简易，性能稳定，无核酶和蛋白酶污染，萃取纯度和产量皆高。 

技术背景

叶绿体（chloroplast）是绿色植物进行光合作用和能量转化的重要细胞器。叶绿体是细胞质中的一种色素体，因含叶绿素而成绿色。叶绿体由外被（envelope）、类囊体（thylakoid）和基质（stroma）组成。叶绿体DNA是一种闭合环状双股结构，含有10至30个基因，编码200个蛋白质。  

实验步骤

实验开始前，将试剂盒里的净化液（Reagent C）和活性液（Reagent D）冻融，然后移取20微升活性液（Reagent D）、 1毫升净化液（Reagent C）和4毫升的裂解液（Reagent B）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，置入冰槽里备用。然后进行下列操作。

1． 准备好新鲜的植物种子组织，并秤重以确定1至3克组织重量 

2． （选择步骤）放进预冷的50毫升锥形离心管

3． （选择步骤）加入5毫升清理液（Reagent A）清洗1次

4． 用刀片切碎种子组织或液氮里碾碎种子组织成粉末

5． 放进一个预冷的15毫升锥形离心管

6． 加入预冷的5毫升裂解工作液

7． 涡旋震荡5秒，充分混匀

8． 即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器

9． 置于冰槽里用匀浆棒匀化组织（约80下）（注意：参见注意事项8）

10． （选择步骤）准备1个小型漏斗，内衬尼龙丝或60微米尼龙网，置于50毫升锥形离心管上

11． （选择步骤）将所有组织匀浆液移入到小型漏斗里过滤（注意：可以使用4层纱布替代）

12． 放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为200g

13． 小心移出上清液（注意：不要触碰沉淀物）到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管（如果跳过过滤步骤或上清液含有肉眼可见的残渣，重复离心5分钟一次，速度为200g）——此步骤去除细胞壁残渣、细胞核和未溶解的细胞 

14． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1000g

15． 小心抽去上清液，保留绿色沉淀颗粒，避免光照——此步骤获得叶绿体沉淀物

16． 加入500微升保存液（Reagent E），充分混匀沉淀颗粒群

17． （选择步骤）进行叶绿素定量测定（建议使用纯化叶绿体叶绿素（chlorophyll）含量光度法定量检测试剂盒－GMS16061.1）

18． 即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里保存

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定分离的叶绿体内外膜完整

3． 本产品经鉴定分离的叶绿体维持正常活性

4． 本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶

使用承诺

极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

在运用ELISA方法测定抗体方面，通常所用的方法称为间接法，也是目前最常用的方法，其原理：间接法首先用抗原包被于固相载体，这些包被的抗原必须是可溶性的，或者至少是极微小的颗粒，经洗涤，加入含有被测抗体之标本，再经孵育洗涤后，加入酶标记抗抗体，(对人的标本来说即加酶标抗人球蛋白IgG、IgM)，再经孵育洗涤后，加底物显色,底物降解的量，即为欲测抗体的量，其结果可用目测或用分光光度计定量测定。

操作步骤：

1.将抗原按5 μg/ml稀释于碳酸盐缓冲液(pH 9.6)，100 μl /孔，4℃过夜。

2.次日PBS－T清洗4次(快1慢3，间隔5分钟)。

3.加2％BSA封闭室温1 h，200 μl /孔。

4.阳性对照从10ug/ml，做倍必稀释，待测血清从1：50做倍比稀释，预试验后确定稀释倍数及阳性对照的起始浓度及稀释数量（以可以做标准曲线为参数），室温1h。

5.PBS－T清洗4次(快1慢3，间隔5分钟)。

6.加入1：3000（不同公司有不同的推荐稀释度） PBS－T稀释的HRP标记的山羊抗人IgG，100 μl /孔，室温1h。

7.PBS－T清洗4次(快1慢3，间隔5分钟)。

8.显色，100 μl /孔，颜色变深后中止显色，2M硫酸在BIO－RAD酶标仪上读数，可用ABTS，OPD，TMB等

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组份订购信息

编号 名称 规格

GMS16007.2 植物种子活性叶绿体分离试剂盒 20次

GMS16007.2A 清理液（Reagent A） 500毫升

GMS16007.2B 裂解液（Reagent B） 100毫升

GMS16007.2C 净化液（Reagent C） 100毫升

GMS16007.2D 活性液（Reagent D） 1毫升

GMS16007.2E 保存液（Reagent E） 50毫升

试剂盒订购信息 

 上海极威生物科技有限公司（Shanghai JIwei Biological Technology Co., Ltd.）成立于上海，公司由专业人员提供全程咨询和技术支持，包括确定测定指标、选择合适的试剂盒规格、试剂盒保存、预测定和测定结果分析等。公司主营产品有elisa试剂盒，小鼠elisa试剂盒，大鼠elisa试剂盒，植物elisa试剂盒，食品安全系列试剂盒，糖尿病系列试剂盒，细胞因子系列试剂盒，血浆相关指标elisa试剂盒，一步法试剂盒，生化试剂盒，标准品，细胞株，生化试剂，技术服务（生化测试、液相气相检测、ICP-MS测试），使用的检测试剂盒，让用户省心；专业的检测服务，让用户省力；优惠的价格，让用户省钱。极威生物已经为广大用户提供了生化检测试剂盒和代测服务，帮助他们轻松获得了真实可靠的检测数据，显著提高了用户的科研效率，为其发表高水平的研究论文提供了坚实的平台；为研究生按时毕业，导师顺利结题、申请新课题和晋升职称提供了实实在在的帮助，公司客户遍布国内各大学、医院、研究所、卫生防疫、生物公司等单位，得到广大客户的一致信赖。