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亚细胞定位培养-亚细胞定位公司-洋葱亚细胞定位方法

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武汉思特进科技发展有限公司主营：动植物，细菌，细胞生物实验

武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年，是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司；公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台；可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。

植物中,WRKY转录因子家族成员众多,近年来成为植物分子生物学研究的热点。由于其编码蛋白的N-端具有高度保守的WRKYGQK氨基酸残基序列,人们将其命名为WRKY。其保守的WRKY结构域能与下游基因启动子W-box特异性结合,从而调控下游基因的表达水平。目前,诸多研究结果表明,WRKY转录因子在植物中参与生物胁迫、非生物胁迫、种子发育、种子休眠与萌芽、形态建成、衰老等方面的表达调控。前人研究表明,拟南芥转录因子AtWRKY70的表达水平受水杨酸诱导,与该信号途径当中的抗病反应相关联。与型相比,超量表达AtWRKY70的拟南芥植株对青花菜褐茎病(Hyaloperonospora parasitica)、假单胞菌(Pseudomonas syringae)等真菌病表现出了更强的抗性,而对欧文氏软腐菌(Erwinia amylovora)等细菌病则更敏感。同时发现,AtWRKY70对植物的衰老起负调控作用。序列对比分析表明,在杨树当中,PtWRKY89与AtWRKY70高度同源,然而,对于PtWRKY89生物学功能的研究至今尚未报道。本中,我们首先了PtWRKY89基因,并对其进行了组织表达分析及亚细胞定位,进一步构建载体转化毛白杨,在转基因植株中分析了该转录因子在病害胁迫生理过程中的调控作用。

马铃薯（Solanum tuberosum L.）是世界上粮菜兼用型作物，在人们的日常生活和国民经济中起着举足轻重的作用。马铃薯淀粉由于其优良的加工性能,应用范围广泛。在西部大开发的历史机遇下，马铃薯生产和加工将成为西部农村经济的支柱产业，但适合加工用的优良品种少，尤其是淀粉含量高、低还原糖和抗低温糖化的品种资源匮乏，严重的限制了马铃薯加工业的发展。为适应马铃薯加工业的迅猛发展，选育适合加工的品种迫在眉睫。但是马铃薯是同源四倍体，遗传分离复杂，加之高淀粉、低还原糖和低温下不糖化的育种材料有限，故运用常规育种方法培育淀粉含量高、低还原糖和抗低温糖化的优良品种难度极大。基因工程技术则可以打破物种间的界限，使得外源基因在受体植株的特定时空表达，近年来随着人们对淀粉生物合成途径及其相关酶的进一步深入研究及分子生物技术的日趋成熟，使得运用基因工程技术调控淀粉低温糖化代谢过程中相关酶的活性从而提高马铃薯块茎淀粉含量成为可能。

洋葱(Allium cepa L.)属百合科葱属,是世界主栽蔬菜之一,也是我国主要的出口蔬菜之一。FT(FLOWERING LOCUS T)基因是开花植物光周期反应过程中调控植物成花的关键基因,也是重要的开花整合因子。实验室在前期工作中已经成功了洋葱的开花素类似基因Ac FT1及Ac LFT,为确定其功能,本试验分别构建了Ac FT1及Ac LFT的正义、反义和RNAi干扰的植物表达载体,通过冻融法导入到根癌农EHA105中,进而通过花序侵染法转入模式植物拟南芥中。通过荧光定量PCR法测定Ac FT1及Ac LFT在拟南芥抽薹前叶片中的相对表达含量,观察转化植株的形态学指标,继而确定Ac FT1及Ac LFT在洋葱成花中的作用,为实现洋葱抽薹开花的基因调控提供参考。试验结果归纳如下:⑴构建了Ac FT1的正义植物表达载体p Z-Ac FT1,反义植物表达载体p R-AcFT1,RNAi植物表达载体p RNAi-Ac FT1;构建了AcLFT的正义植物表达载体p Z-AcLFT,反义植物表达载体p R-Ac LFT,RNAi植物表达载体p RNAi-Ac LFT.;⑵利用冻融法将重组质粒p Z-Ac FT1、p R-Ac FT1、p RNAi-Ac FT1、p Z-Ac LFT、p R-Ac LFT、p RNAi-Ac LFT导入根癌农EHA105中,利用花序侵染法对拟南芥进行转化。