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武汉思特进科技发展有限公司主营:动植物,细菌,细胞生物实验




武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。




分别用70%乙醇和灭菌蒸馏水清洗金粉(直径为1 μm),加入灭菌蒸馏水制成金粉悬浮液,取100 μL 放在含有1.0 cm2 洋葱表皮的玻璃皿中,边振荡边加入10 μL pCambia2301-GaMYB2-GFP质粒,逐步加入40 μL 0.1 mol·L-1 亚精胺和100 μL2.5 mol·L-1 CaCl2,振荡混匀。基因枪GDS-80轰击时氦气罐的气压为1 300 psi,取10 μL DNA 包裹好的微粒悬浮液加到基因枪中央,进行轰击,之后放置25℃避光过夜培养,使用ConfocalLaser激光共聚焦显微镜观察。


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目的构建通用型植物GFP标签蛋白表达载体,研究蛋白质的细胞内定位对蛋白质组学和代谢组学等研究的意义。方法构建2种GFP标签蛋白质表达载体,分别在GFP的N和C端预留位点,以目的基因。利用该基因载体,分别内切酶Fok I的切割结构域与MS2噬菌体外壳蛋白MCP的串联蛋白(Fok I:MCP:Fok I,FMF)至GFP的N和C端,得到FMF与GFP的融合蛋白GFP:FMF和FMF:GFP,其中FMF的N端带有细胞核定位信号。利用农介导植物瞬时表达侵染本氏和洋葱表皮细胞,观察GFP荧光表达情况。结果成功构建了2种融合了目的基因和GFP的表达载体p ER35GFP-FMF和p ER35FMF-GFP。激光共聚焦结果显示侵染了只含GFP载体的农的细胞,可在细胞核和细胞质中检测到GFP的绿色荧光,而侵染了含核定位信号FMF:GFP和GFP:FMF 2种融合蛋白载体的农的细胞,只在细胞核中观察到绿色荧光。结论该载体系统可运用于研究蛋白质在植物细胞中的亚细胞定位,具有简单、和通用性的特点。


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重金属转运蛋白P-type ATPase(HMA)已被证实参与植物体内的重金属运输,HMA5主要参与铜的转运。在模式植物拟南芥、水稻和黄瓜中对HMA5基因进行了较多的研究,但是对豆科植物HMA5的研究鲜见报道。实验室前期在天蓝苜蓿中分离到一个与铜胁迫及共生结瘤相关的HMA5基因,为了对此类基因在豆科植物共生结瘤中的作用进行深入研究,本研究对全基因组已测序的模式豆科植物蒺藜苜蓿的基因组进行筛查,寻找HMA5同源基因并通过表达模式分析初步判断其与共生结瘤的关系,在此基础上,以其中的MTR_8g079250基因为对象,进行亚细胞定位、组织表达、RNA干扰和过量表达等研究,初步鉴定该基因在共生结瘤中的功能。1、MTR_8g079250的亚细胞定位构建MTR_8g079250的洋葱表皮亚细胞定位载体,通过基因枪轰击转化洋葱表皮细胞,在激光共聚焦显微镜下观察到MTR_8g079250::GFP融合蛋白主要在细胞膜上表达,在细胞核上也有微量的表达;构建MTR_8g079250的叶片亚细胞定位载体,通过根癌农介导注射叶片的方式进行转化,结果表明目的基因主要定位在细胞膜和细胞核上;2、MTR_8g079250的组织表达构建PMTR_8g079250::GUS融合表达载体,通过农发根转化的方式转入蒺藜苜蓿根部,经培养后,进行GUS染色观察。

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