科研
用途范围
美国/中国
产地
xuanya
品牌
48T
规格
黄经理
主营: 化学原料和化学制品制造业
上海市奉贤区
【产品名称】
商品名称:猪痢疾蛇形螺旋体(SH)荧光PCR检测试剂盒
Name :Real-Time PCR Method
【包装规格】48T/盒
本试剂盒适用于检测标本中指标的定量检测,辅助诊断。
名 称 |
规 格 |
酶液 |
50μL×1 管 |
反应液 |
1.0mL×1 管 |
阳性质控品 |
50μL ×1 管 |
阴性质控品 |
250μL ×1 管 |
核酸提取液 |
1.5ml×2管 |
详见说明书
注:
1) 不同批号试剂不能混用。
2) 试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。
本试剂盒对指标特异核酸序列设计引物和探针,用一步法荧光RT-PCR 技术对指标 RNA 进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
【使用方法】
1. 样品处理(样本处理区)
1.1 样本前处理
【标本采集】
咽拭子:应使用与用采样拭子,适度拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位,应避免触及舌 部 ; 迅 速 将 拭 子 放 入 标 本 采 集 管 中 , 旋 紧 管 盖 并 密 封 , 以 防 干 燥 。
全血:疑似感染病人的静脉血 2mL 至 EDTA-2Na 抗凝管,8000rpm 离心 2min,取适量上清液于 1.5mL 灭菌离心管中。痰: 以清晨的 口痰为宜。先用清水漱口,嘱患者用力咳出深部的痰于无菌样本保存管,密封,即可送检。
【标本采集】
病死或扑杀禽,取喉气管、脑、胸肌、心肌和肺等组织;待检活禽,用棉拭子取呼吸道分泌物或排泄物,置于 1mL 50%甘油生理盐水中。
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但丌能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。
1.2DNA 提取
1) 对上述处理好的标本加入 50μL 核酸提取液,100℃恒温处理 10min,13,000rpm 离心 5min,取上清液转移至新的 1.5mL EP 管,-20℃保存;
2) DNA 的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生产的 DNA 提取试剂盒(离心柱提取法),请严格按照试剂盒说明书进行操作。
推荐采用上海烜雅生物科技有限公司生产的RNA 提取试剂盒(离心柱提取法),请按照试剂盒说明书进行操作。
根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;样品每满 7 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:
试剂 |
反应液 |
酶液 |
用量 |
20μL |
1μL |
将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中,21uL/管。
将步骤 1 提取的 RNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;
4.2 设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25μL;荧光通道选择: 检测通道
(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光,选择 None 即可。
4.3 推荐循环参数设置:
步骤 |
循环数 |
温度 |
时间 |
收集荧光信号 |
1 |
1 cycle |
42℃ |
20min |
否 |
2 |
1 cycle |
95℃ |
10min |
否 |
3 |
40 cycles |
94℃ |
15sec |
否 |
55℃ |
30sec |
是 |
① 所有操作严格按照说明书进行;
②试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;
③反应液应避光保存;
④反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;
⑤使用一次性吸头、一次性手套和各区与用工作服;
⑥样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;
⑦实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;
⑧试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
5.1 结果分析条件设定
设置 Baseline 和 Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节 Baseline 的start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、
stop 值(一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。
阳性:检测通道 Ct 值≤35.0,且有明显的扩增曲线。
可疑:检测通道 Ct 值>35.0,且出现明显曲线的样本建议重复试验,重复试验结果如果同样出现 Ct 值≤35.0 和明显扩增曲线则为阳性,否则为阴性。
阴性:样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。
阴性质控品:无明显扩增曲线且无 Ct 值显示;
阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。
① 样本检测结果不样本收集、处理、运送以及保存质量有关;
②样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;
③阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;
④病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;
⑤不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;
⑥试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;
-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次,有效期 12 个月。
ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
病死或扑杀动物,取水泡皮及水泡液;待检活动物,取 O/P 液 2~3mL。<
大鼠髓系细胞触发受体-1(TREM-1)ELISA试剂盒
大鼠内分泌腺来源的血管内皮生长因子(EG-VEGF)ELISA试剂盒
大鼠胶原酶I(Collagenase I)ELISA试剂盒
大鼠髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体IgG(MPO-ANCA IgG)ELISA试剂盒
野兔热(Tul)荧光PCR检测试剂盒
大鼠Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)ELISA试剂盒说明书
大鼠血管生成素2(ANG-2)ELISA检测试剂盒
兔子肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3)ELISA检测试剂盒
大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA检测试剂盒
大鼠血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA检测试剂盒
禽白血病病毒(ALV)检测试剂盒(RT-PCR法)
兔子肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3)ELISA试剂盒
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