科研
用途范围
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纯度
国产
产地
上海沪峥
品牌
李小姐
主营: 化学原料和化学制品制造业
上海市奉贤区
上海沪峥专业生产销售猪瘟一步法RT-PCR诊断试剂盒现货,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户咨询认购。
产品详细信息
名称:猪瘟一步法RT-PCR诊断试剂盒
规格: 20T/50T
品牌:上海沪峥
【用途】 用于猪瘟病毒病的检测、诊断和流行病学调查。
1.RNA提取
(1) 取疑似猪瘟的病料(*、淋巴结、*、扁桃体)1~4g于无菌研钵,研磨并用Hanks液或PBS稀释成1:4乳剂,分装1.5ml灭菌EP管,反复冻融2~3次,8000r/min离心5分钟。
(2)取200uL上清液(或标准品T),移入新的1.5mL灭菌EP管中,加入400uLSR-I,反复颠倒几次混匀,室温放置5~10分钟。
(3)加入200uL氯仿,漩涡振荡15秒混匀。室温下放置2~3分钟。
(4)12000r/min离心10分钟,取上层水相(注意:切勿吸取到里两相之间的杂质),转移到一个新的EP管中,再加入等体积异丙醇混匀,室温放置10分钟。
(5)12000r/min离心10分钟,弃去上清,加入SR-II 700uL,充分洗涤沉淀RNA后,12000r/min离心5分钟,小心吸去上清(注意:严格防止RNA丢失)。
(6)用洁净吸水纸吸干管壁的SR-II,室温放置2~3分钟。用20uLTU-5溶解,即为模板,即用或-70℃冻存备用。
3 .PCR操作
4.电泳
称量0.25g琼脂糖,放入锥形瓶,加入25mL 1×TAE液(可配置50×浓缩液,储存备用),于微波炉中熔解,加入1.5uL的TU-8混匀。封闭好电泳槽,加入梳子,倒入琼脂凝胶,待凝固后,将PCR产物5uL混合1uL TU-7,加样于凝胶孔中,同时在相邻孔加3uLTU-6,在120v 电压下,1×TAE液中电泳15分钟,在紫外成像仪下观察结果。
【结果判定】
在约510bp位置出现扩增带,实验结果为阳性
猪瘟一步法RT-PCR诊断试剂盒说明书
【注意事项】
1. 每次使用,开盖之前请先瞬时离心,使试剂沉于管底。
2. 所有试剂在要求温度下保存,-20℃保存试剂尽量减少反复冻融,使用后的试剂立即放回,避免在室温搁置太久。
3. 尽量建立PCR试验操作区,避免交叉污染。
4. 加样和反应程序严格按照说明书进行,由于操作失误、移液器不精确、定时不准确造成无结果情况,不予负责。
5. 吸头、离心管和PCR管在使用前,要高压灭菌,操作过程尽量不要用手接触到管内壁,可用镊子夹取。
6. 注意防止试剂污染,在有效期限前用完。
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